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        shRNA敲減慢病毒

        一、基因敲減
        基因敲減(knock-down,KD)通常也稱基因沉默(Silence),是指通過降解具有同源序列靶基因的mRNA,達到阻止基因表達的作用,常用技術有siRNA,shRNA等。

        二、shRNA基因敲減原理
               shRNA(short hairpin RNA),即短發夾RNA,包括兩個短反向重復序列,中間由一莖環(loop)序列分隔組成發夾結構,該元件由RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)啟動子控制。隨后再連上5~6個“T”作為RNA聚合酶Ⅲ的轉錄終止子。該發夾序列在細胞內形成一個“雙鏈RNA”(dsRNA),被胞內核酸內切酶(Dicer)識別并切割成小片段,這些片段在mRNA解旋酶的作用下解鏈。其中反義鏈與內切酶、外切酶、解旋酶等結合形成RNA誘導的沉默復合體(RNA-InducedSilencingComplex,RISC),RISC與靶基因mRNA的同源區特異性結合,對靶基因mRNA進行切割,從而阻斷目的基因表達。慢病毒介導的基因沉默原理如Fig.1所示。

        三、shRNA慢病毒優勢
        1. 慢病毒轉導效率高,可轉導細胞種類多;
        2. 慢病毒載體所攜帶的敲減元件可以整合插入細胞基因組,實現目的基因長期穩定敲減;
        3. 利用慢病毒敲減技術構建的穩轉細胞株更適合做體內實驗;
        4. 慢病毒敲減技術成熟,安全性好,認可度高;

        四、維根生物shRNA慢病毒載體種類豐富

        啟動子類型

        嘌呤霉素抗性

        殺稻瘟菌素

        U6

        pLenti-Puro+U6-MCS

        pLenti-BSD+U6-MCS

        pLenti-GFP-Puro+U6-MCS

        pLenti-GFP- BSD +U6-MCS

        pLenti-RFP-Puro+U6-MCS

        pLenti-RFP-BSD +U6-MCS

        H1

        pLenti-Puro+H1-MCS

        pLenti-BSD +H1-MCS

        pLenti-GFP-Puro+ H1-MCS

        pLenti-GFP-BSD + H1-MCS

        pLenti-RFP-Puro+ H1-MCS

        pLenti-RFP-BSD + H1-MCS

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